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TALEN敲除小鼠定制

TALEN(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)靶向基因修飾/敲除技術是最近發展起來的一項極具革命性的新技術。用TALEN方法制作knock out小鼠,不需要經過傳統敲除所需要的ES細胞打靶階段,周期大大縮短。相比于ZFN技術,TALEN的優勢也非常明顯突出,它的識別切割的效率更高,幾乎可以靶向任何序列,不受上下游序列的影響。

論文中注明小鼠來源于南京大學—南京生物醫藥研究院可獲現金獎勵:

      獎勵條件            獎勵額度        

影響因子小于5分         500元

影響因子5—10分        1000元

影響因子10—20分       2000元

影響因子20分以上       5000元

相關已發表文獻

TAL (transcription activator-like) effectors是細菌Xanthomonas感染植物時分泌的蛋白分子。這些蛋白分子通過其中心區的34個氨基酸的重復序列識別并結合到宿主基因的啟動子上,激活植物基因的表達,從而幫助細菌進行感染。TAL effectors的此特征很快被大家認識并利用來作為靶向基因編輯的工具。

TALEN(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)靶向基因修飾/敲除技術是最近發展起來的一項極具革命性的新技術。TALEN蛋白分子包含DNA結合域和Fok1核酸酶,兩個TALEN分子分別結合到靶點兩側,Fok1形成二聚體并發揮切割作用,生成雙鏈斷端,細胞內的非同源性末端接合(Non-homologous end joining, NHEJ)修復機制啟動,斷口被修復同時隨機的刪除和插入一定數量的堿基,造成移碼導致基因失活。

用TALEN方法制作knock out小鼠,不需要經過傳統敲除所需要的ES細胞打靶階段,周期大大縮短。相比于ZFN技術,TALEN的優勢也非常明顯突出,它的識別切割的效率更高,幾乎可以靶向任何序列,不受上下游序列的影響。此項技術現已經成功應用于細胞、斑馬魚、果蠅、大鼠、小鼠及植物上,并且被研究者不斷地嘗試應用到其他更多的物種。此技術為研究者提供了一種新的思路,開辟了一條嶄新的道路。


       Genomic control enabled by engineered TAL effector proteins
    (Science, Vol. 333, No. 6051. (30 September 2011), pp. 1843-1846)

           TALEN原理圖(Nucleic Acids Research, 2011, 1–11)


參考文獻:
1.Cermak, T., Doyle, E.L., Christian, M., Wang, L., et al. () Efficient design and assembly of custom TALEN and other TAL effector-based constructs for DNA targeting. Nucleic Acids Res., 2011, 1-11.
2.Bogdanove AJ, Voytas DF. TAL effectors: customizable proteins for DNA targeting. Science, 2011, 333(6051):1843-6.

 

敲除小鼠制作流程

?    分析gene序列,選擇靶位點,設計TALEN載體

?    測試TALEN載體的打靶效率

?    受精卵的顯微注射,移植

?    F0代小鼠的鑒定

?    F0代小鼠的遺傳檢測

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TALEN相比于傳統同源重組的優點:



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